人膠原蛋白Ⅱ檢測(cè)試劑盒即酶聯(lián)**吸附試驗(yàn)的通用步驟
捕獲抗體、標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)抗體均為凍干粉，使用前應(yīng)保存于-20℃,捕獲抗體、標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)抗體重懸后，在4℃時(shí)*長(zhǎng)保存2周。如果您已重懸了EDK的各組份，并準(zhǔn)備在2周之后使用，請(qǐng)將重懸的組分分裝并凍存于-20℃，*長(zhǎng)可保存6個(gè)月。
人膠原蛋白ⅡELISA試劑盒, 英文名稱：Collagen Ⅱ (HCB Ⅱ) ELISA kit
貨 期：現(xiàn)貨,主要用途：科研檢測(cè),用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。
與EDK的其它三個(gè)組分不同，Avidin-HRP為即用型
目的是避免反復(fù)凍融或長(zhǎng)期4℃保存對(duì)該組分的功能損害。收到Avidin-HRP后，立即將其分裝為6ul/管，共10管，凍存于-20℃，*長(zhǎng)可保存2年
人膠原蛋白Ⅱ檢測(cè)試劑盒第1階段：
捕獲抗體包板,將捕獲抗體稍作離心，使抗體集中于管底,用無菌水將捕獲抗體重懸至說明書上要求的濃度，靜置10分鐘以使抗體完全溶解,重懸的抗體以*高速度離心3分鐘,用1xPBS稀釋捕獲抗體至說明書上要求的濃度,輕輕顛倒或振蕩混勻，一定不要產(chǎn)生氣泡。
立即在每個(gè)ELISA板孔中加入100uL捕獲抗體,將封板膜用力壓蓋在ELISA板上，注意不要使抗體滴濺在封板膜上,25 ℃孵育過夜，或者37℃孵育2-4個(gè)小時(shí),洗板時(shí)需將液體倒掉，并在干凈的吸水紙上拍干,每孔加入300ul 洗液，然后再將液體吸除,該步驟再重復(fù)3次，總共洗滌4次,*后一次洗滌后，將板倒置以去除液體，并在干凈的吸水紙上拍干,ELISA板還有其它幾種洗滌方法。無論使用哪種方法，請(qǐng)?jiān)谡麄€(gè)ELISA實(shí)驗(yàn)過程中保持一致。
人膠原蛋白Ⅱ檢測(cè)試劑盒**階段：封閉非特異性結(jié)合
牛血清白蛋白作為封閉試劑，可封閉塑料孔內(nèi)任何未結(jié)合蛋白的位點(diǎn),每孔中加入300ul封閉液,封板，并在25 ℃孵育至少1小時(shí)。
第3階段：抗原的特異性結(jié)合,在上一孵育過程結(jié)束前,將標(biāo)準(zhǔn)品稍作離心,并用無菌水重懸至要求的濃度,靜置至少10分鐘，以使標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解,重懸結(jié)束后，取出板并洗滌4次,重懸的標(biāo)準(zhǔn)品以*高速度離心3分鐘,稀釋到所需濃度，輕輕顛倒或振蕩混勻,標(biāo)準(zhǔn)曲線在ELISA板上的區(qū)域?qū)Ｓ糜跈z測(cè)已知濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,如果使用多道移液器，除**列外的所有標(biāo)準(zhǔn)曲線孔中均加入100ul稀釋液,然后，人膠原蛋白Ⅱ檢測(cè)試劑盒在標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的**列中加入200ul標(biāo)準(zhǔn)品溶液,依次倍比稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品至少有6個(gè)濃度,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線孔中液體的終體積應(yīng)為100ul,標(biāo)準(zhǔn)品至少有6個(gè)濃度，每個(gè)濃度為3個(gè)復(fù)孔，再設(shè)6個(gè)空白孔，其中僅含稀釋液,空白孔是必須的，它們將用來評(píng)價(jià)試劑盒檢測(cè)樣本的效能,然后，在剩余孔中加入待測(cè)樣本，每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔,樣本中若待檢抗原的濃度過高，要得到*佳結(jié)果可能需對(duì)樣本進(jìn)行稀釋,封板，25 ℃孵育2小時(shí)。
人膠原蛋白Ⅱ檢測(cè)試劑盒第4階段：加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體以形成夾心,孵育結(jié)束前，稍離心檢測(cè)抗體，并用無菌水重懸，靜置10分鐘,孵育結(jié)束后，取出板，洗滌4次,*高速度離心3分鐘。
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